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為大家講解percoll細胞分離液的配置與使用

更新時(shí)間:2024-03-12

閱讀:2020

  percoll細胞分離液是一種經(jīng)過(guò)聚乙烯吡咯烷酮處理過(guò)的硅膠顆粒,經(jīng)過(guò)高速離心后可形成連續密度梯度,由于Percoll擴散常數低,所形成的梯度十分穩定。采用預先形成的密度梯度時(shí)可在低離心力(200~1000g)于數分至數十分鐘內達到滿(mǎn)意的細胞分離結果。此外,該分離液不穿透生物膜,對細胞無(wú)毒害,因此廣泛用于分離細胞、亞細胞成分、細菌及病毒,還可將受損細胞及其碎片與完好的活細胞分離。Percoll常用于分離和傳話(huà)植物原生質(zhì)體、核、葉綠體、和線(xiàn)粒體。
 
  percoll細胞分離液的配置與使用:
 
  1、不同濃度(密度)Percoll分離液的制備: 先用9份Percoll分離液與1份8.5% NaCl混合達到生理性滲透壓,然后用生理溶液(0.85% NaCl)稀釋到所需濃度。
 
  2、不連續密度梯度Percoll層的制備: 先將試管壁用牛血清濕潤,除去多余血清,這種預處理可使逐層疊加的Percoll液平穩沿管壁流下,使形成滿(mǎn)意的界面。在制備過(guò)程中一般用長(cháng)針頭注射器從高密度向低密度逐層放置,有時(shí)相鄰兩層Percoll比重相差不大時(shí),可將Percoll液放入注射器中,小針頭斜面緊貼管壁,任其自然慢慢流下。
 
  3、裝樣:樣品體積和細胞濃度根據不同細胞而異,一般加樣體積不宜過(guò)大,細胞濃度也不可過(guò)高,否則會(huì )影響細胞的分離和回收。
 
  4、離心:一般采用離心力為400g,時(shí)間20~25min。由于多層Percoll之間密度差別不大,因此離心機加速、降速時(shí)要慢,要平穩。
 
  5、取樣:當所要分離的細胞絕大部分在兩層的界面時(shí),可逐層去除Percoll液后收集界面部位的細胞;有時(shí)大部分細胞位于Percoll層中,則需要逐層收集。收獲含有Percoll液的細胞經(jīng)2次洗滌后可供培養或檢測用。
 
  percoll細胞分離液的優(yōu)點(diǎn):
 
  Percoll滲透性低、不穿透細胞、密度高、無(wú)毒害,是目前較理想的介質(zhì)。Percoll密度梯度離心已被多次成功地用于動(dòng)物細胞及其細胞器的分離,純化了包括人血液細胞、骨髓細胞、紅血球細胞、白血球細胞、淋巴細胞、肝細胞等在內的十余種動(dòng)物細胞。
percoll細胞分離液